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蛋白層析柱的工作原理,我們有必要強調下

更新時間:2024-11-11瀏覽:1415次

  蛋白層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外,直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關,但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞,一般不超過1米。
  蛋白層析柱的工作原理
  1.預處理:在吸附樹脂的生產過程中,一般采用的是工業級原料,產品沒有經過進一步純化處理,樹脂內部殘留少量單體,所以在使用之前,需用水溶性溶劑對其浸泡處理,然后用去離子水通過樹脂層,置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。
  2.逆流洗柱:用水洗出去水離子及破碎填料,樹脂裝入后,用蒸餾水反洗樹脂層,直至出水清晰、無氣味、無細碎樹脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹脂層,至出水呈中性為止。
  3.水洗:水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。
  4.吸附:吸附操作自上而下(或自下而上)通液,可采用不同流速,以選取*條件。流出液每隔一段時間取樣檢測,達泄漏點停止吸附,或多柱串聯達飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物,該過程應控制料液的速度及吸附量,大孔樹脂應*浸泡在料液里,以提高吸附效果和運行穩定性。
  5.解吸、再生:解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑,單柱吸附時,解吸與吸附操作對流為佳。解吸劑沸點要低以便回收處理。